克隆 PCR 产物的最优条件是什么？

最佳插入片段：载体比需实验确定。1：1（插入片段：载体）常为最佳比，摩尔数比 1：8 或 8：1 也行。应测 定比值范围。连接用 5uL 2X 连接液， 50ng 质粒 DNA，1Weiss 单位的 T4 连接酶，插入片段共 10uL。室温保温 1 小时，或 4℃过夜。在这 2 种温度下，缺 T-凸出端的载体会自连，产生蓝斑。室温保温 1 小时能满足大多数克隆要 求，为提高连接效率，需 4℃过夜。