问 PCR出现片状拖带或涂抹带的原因及对策

答 PCR 扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量 差，dNTP 浓度过高， Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。其对

问 PCR出现非特异性扩增带的原因及对策

答 PCR 扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。非特 异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、 或

问 PCR的假阴性，不出现扩增条带

答 PCR 反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量 ④PCR 循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。        模板：①模

问 PCR 产物的电泳检测时间

答 一般为 48 h 以内，有些最好于当日电泳检测，大于 48 h 后带型不规则甚致消失。

问 细胞的体外培养何时用瓶皿培养，何时用孔板培养？

答 在细胞体外培养中，培养瓶皿和孔板的选择主要取决于实验目的、细胞数量需求、处理条件数量以及后续检测方法等因素。以下是两者的典型应用场景和选择依据：1. 培养瓶/皿

问 常用的RNA酶抑制剂

答 1. 焦磷酸二乙酯（DEPC）：是一种强烈但不彻底的 RNA 酶抑制剂。它通过和 RNA 酶的活性基团组氨酸的咪 唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。2.

问 防止RNA酶污染的措施

答 1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于 180℃的高温下干烤 6hr 或更长时间。2. 塑料器皿可用 0.1% DEPC 水浸泡或用氯仿冲洗（注意：有机玻璃器具因可

问 克隆 PCR 产物的最优条件是什么？

答 最佳插入片段：载体比需实验确定。1：1（插入片段：载体）常为最佳比，摩尔数比 1：8 或 8：1 也行。应测 定比值范围。连接用 5uL 2X 连接液， 50n