
【储存条件】 长期保存,请置于-20˚C,有效期24个月。经常使用,可置于4˚C保存至少6个月。直接扩增最佳伴侣,收到后置于常温保存
【产品简介】
本产品包含的SuperFast直接扩增裂解液可以迅速裂解酵母、农杆菌、革兰氏阳性菌、放线菌等微生物的细胞壁,短暂煮沸后的液体可以直接作为PCR模板;同样可以用于动植物组织细胞样品的裂解,是各种粗样品直接PCR的必备神器。
本产品包含高纯度Fast HIFI Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂、优化剂以及稳定剂,浓度为2×。Fast HIFI Taq DNA聚合酶比普通Taq酶扩增效率高、错配率低,具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点。可最大限度地减少人为误差,可用于高特异性PCR反应及GC含量较高(>60%)具有二级结构等复杂模板的扩增和大规模基因检测。PCR产物的3’端不带突出的碱基'A',纯化后可直接用于TA载体克隆。本产品有含红色染料,在PCR反应完成后,不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳;也可经过纯化处理,以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。红色染料可指示电泳进程,其迁移速度在1% TAE琼脂糖凝胶中与800 bp双链DNA片段相近。
【产品组分】

【适用范围】 1.基因检测:本产品批次间误差很小,特别适合大规模基因检测、半定量PCR实验和微量DNA的检测。2.用于从复杂模板如基因组等扩增PCR产物,如表达基因的克隆、基因的定点突变和细胞内基因点突变的分析(SNP)等。
【所需试剂】 使用者仅需准备PCR反应的模板、引物等。
【样本处理】
样本裂解:
1.菌液样品
将培养至对数生长期的菌液(酵母、革兰氏阳性菌、农杆菌、放线菌培养液等)以菌液和裂解液体积比1:10混合(2 μL菌液:20 μL裂解液),直接沸水浴5分钟,短暂离心后取1-2 μL作为后续PCR模板。
2.平板上的菌落
用灭菌枪头挑取少量菌体,加入20 μL裂解液,吹吸混匀,95℃或沸水浴5分钟,12000 rpm离心1-2分钟,取1-2 μL作为后续PCR模板。
3.血液、培养细胞或其他液体样品(尿液、组织液、培养细胞或者各种体液)
以液体样本和裂解液体积比1:10混合(2 μL样本:20 μL裂解液),95℃或煮沸5分钟,12000 rpm离心1-2分钟,取1-2 μL作为后续PCR模板。
4.植物组织样品(幼嫩叶片,果实、种子、根组织等)、动物组织样品(昆虫、鼠尾、鼠耳等组织)和土壤等环境组织样品,使用“微波炉或热压”处理:
(1)1.5mL离心热刺打孔:取实验室最常见的5-10mL注射器配套针头,用酒精灯加热针头后,迅速扎向1.5mL离心管管盖,以防止后续操作过程中管盖炸开。扎孔后的离心管备用。
(2)取样:取1-2平方毫米的叶片或组织放入上述1.5mL离心管。
(3)加裂解液:吸取40-100μL裂解液加入在上述1.5mL离心管,用黄枪头对着叶片挫直至挫烂,并让裂解液完全浸没样本。注意:裂解液的使用体积由样本幼嫩程度和坚硬程度调整,越老越硬的样本需要加更多的裂解液。
(4)微波炉处理:将上述含有样本和裂解液的1.5mL离心管,放入微波炉中,选择“高火”或“中高火”按钮,时间1min。注意:微波炉处理时间由样本幼嫩程度和坚硬程度调整,越老越硬的样本需要加更长的时间。
(5)如果微波炉处理效果不好,可以尝试高压锅处理:将上述含有样本和裂解液的1.5mL离心管,放入家用高压锅中,处理时间5-10min。注意:热压处理时间由样本幼嫩程度和坚硬程度调整,越老越硬的样本需要加更长的时间。
【操作示例】

【注意事项】
1.直接扩增裂解液应室温保存,如冷冻或冷藏状态下取出,使用前查看是否有沉淀,一定要确保裂解液没有沉淀,否则应在 37℃水浴中重新溶解后摇匀使用。
2.请摸索出最适合您实验的裂解液和样本的比例关系,样本太多会超出裂解液的处理上限,导致裂解不完全;样本太少会造成模板浓度过低,导致PCR失败。
3.较难处理的组织可以用50-100 μL裂解液。
4.裂解液处理后的用做PCR模板,加入的量不要超过PCR体系的1/10。
5.剩余的裂解产物放在-20℃保存一个月以上,以备后续再次检测。再次取出做模板时,务必12000 rpm离心1-2分钟才能取上清1-2 μL做PCR模板。
6.以粗提物为模板做PCR,因为模板量更少,循环数应比用CTAB提取DNA做模板PCR循环数多2-3个循环。
7.以粗提物为模板做PCR,降低扩增速度有利于得到稳定结果,建议延伸速度60 s/1kb。