【储存条件】 -20˚C。
【产品简介】
SuperFast系列内切酶是通过基因工程重组技术，可在5-15 min内精确完成DNA切割的快速限制性内切酶，适用于快速切割质粒DNA、PCR产物、基因组DNA等。SuperFast系列快速内切酶共用一种酶切缓冲液，从而简化了酶切反应体系，另外，有良好的酶活冗余度，可轻松处理底物过量或困难模板的酶切。
Color Buffer包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。Color Buffer的红色染料与2500 bp 双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与10 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。
【识别位点】
【产品组分】
【适用范围】 1.质粒和基因组DNA的酶切。2.PCR产物的酶切。
【操作示例】
1. DNA快速酶切流程
a. 按如下建议的加样顺序配制体系反应液（冰上操作）
注意：本体系指已纯化后的PCR产物。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×SuperFast Buffer加入量可适当减少至2 μL。若下一步进行克隆等实验，酶切前需纯化PCR产物。
b. 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
c. 37℃温育15min（质粒），15~30min（PCR产物），或30~60min（基因组DNA）；
d. 80℃温育20min即可使酶失活，停止反应（可选）。
e. 如果使用Color Buffer进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。
2. 双酶切或多酶切
a. 每种内切酶的用量为1μL，并根据需要适当扩大反应体系；
b. 所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；
c. 如果选用的几种内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。
3. 适用于质粒的扩大反应体系
【甲基化修饰影响】
【质量控制】
1. 功能活性检测:
最适反应温度下，在20μL反应体系中，1μL SuperFast ApaLI能够在15min内完全消化1μg λDNA。
2. 超长时间温育检测：
最适反应温度下，将1μL SuperFast ApaLI与1μg λDNA共同温育3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。
3. 酶切 - 连接 - 再酶切检测：
最适反应温度下，使用10倍酶量的SuperFast ApaLI消化DNA底物，回收酶切产物，在22℃下使用适量Fast T4 DNA Ligase可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
4. 非特异性内切酶活性检测：
最适反应温度下，将1μL SuperFast ApaLI与1μg超螺旋质粒DNA共同孵育4 h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒DNA仍然处于超螺旋状态。
【注意事项】
1. 酶切前建议对PCR产物进行纯化。
2. 3 h孵育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性。
3. 所有内切酶的使用体积总和不得超过总反应体系的1/10。
4. 受CpG甲基化影响，剪切可能阻断。
5. 失活条件为80℃温育20min。
