【储存条件】 -20˚C。
【产品简介】
SuperFast系列快速限制性内切酶可在5 -15min内完成对DNA的特异切割。适用于质粒DNA、PCR产物以及基因组DNA的快速酶切。本公司生产的快速限制性内切酶在通用的10×SuperFast Buffer或10×SuperFast Color Buffer中均具有100%活性，方便在同一反应体系中同时进行多种酶切反应。此外，10×SuperFast Color Buffer内包含红色和黄色示踪染料，方便直接进行产物的凝胶电泳。10×SuperFast Color Buffer内的红色染料与2500bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与10bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。
【识别位点】
【产品组分】
【适用范围】 1.质粒和基因组DNA的酶切。2.PCR反应后质粒模板的去除。
【操作示例】
1. DNA快速酶切流程
a. 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：
b. 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
c. 37℃温育15min（质粒/PCR产物），或30~60min（基因组DNA）；
d. 80℃温育20min 即可使酶失活，停止反应（可选）；
e. 如果使用Color Buffer进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。
2. 双酶切或多酶切
a. 每种快速内切酶的用量为1μL，并根据需要适当扩大反应体系；
b. 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；
c. 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。
3. 适用于质粒的扩大反应体系
注：如果总反应体系大于20 μL，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
4.适用于PCR产物中消化质粒模板
将1μL DpnI加入50μL PCR产物中混匀，37℃温育60min，80℃温育20min热失活，得到的产物可用于下游转化实验。
【甲基化修饰影响】
【质量控制】
1. 活性检测：
37℃下，在20μL通用反应体系中，1μL DpnI能够在15min内完全消化1μg pUC19 DNA。
2. 超长时间温育检测：
37℃下，在20μL通用反应体系中，将1μL DpnI与1μg pUC19 DNA共同温育3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。
3. 非特异性内切酶活性检测：
37℃下，在20μL通用反应体系中，将1μL DpnI与1μg超螺旋质粒DNA共同温育4h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于10%的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。
【注意事项】
1. 不建议进行3h以上的酶切，长时间酶切可能会导致星活性；
2. DpnI酶仅能识别甲基化的位点，从dam⁺菌株中提取的质粒DNA可以作为DpnI酶切底物。
