【储存条件】 -20˚C。
【产品简介】
SuperFast系列快速限制性内切酶可在5-15min内完成对DNA的特异切割。适用于质粒DNA、PCR产物以及基因组DNA的快速酶切。本公司的快速限制性内切酶在通用的10×SuperFast Buffer或10×SuperFast Color Buffer中均具有100%活性，方便在同一反应体系中同时进行多种酶切反应。此外，10×Color Buffer内包含红色和黄色示踪染料，方便直接进行产物的凝胶电泳。10×Color Buffer内的红色染料与2500bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与10bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。
【识别位点】
【产品组分】
【操作示例】
1. DNA快速酶切流程
a. 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：
*本体系指已纯化后的PCR产物。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×Buffer加入量可适当减少至2μL。若下一步进行克隆等实验，酶切前需纯化PCR产物。
b. 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
c. 37℃温育15min（质粒/PCR产物），或30~60min（基因组DNA）；
d. 80℃温育20min 即可使酶失活，停止反应（可选）；
e. 如果使用Color Buffer进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。
2. 双酶切或多酶切
a. 每种快速内切酶的用量为1μL，并根据需要适当扩大反应体系；
b. 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；
c. 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。
3. 适用于质粒的扩大反应体系
注：如果总反应体系大于20μL，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
【甲基化修饰影响】
【质量控制】
1. 功能活性检测：
37℃下，在20μL通用反应体系中，1μL Esp3I能够在15min内完全消化1μg λDNA。
2. 超长时间温育检测：
37℃下，在20μL通用反应体系中，将1μL Esp3I与1μg λDNA共同温育3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。
3. 酶切 - 连接 - 再酶切检测：
37℃下，使用10倍酶量的Esp3I消化DNA底物，回收酶切产物，在22℃下使用Fast T4 DNA Ligase 可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
【注意事项】
1. 不建议进行3h以上的酶切，长时间酶切可能会导致星活性；
2. Esp3I对Dam和Dcm甲基化修饰无影响，但对CpG甲基化修饰的DNA剪切会受影响。在使用前应考虑底物DNA的甲基化状态。
