【储存条件】 -20˚C。
【产品简介】
SuperFast系列快速限制性内切酶可在5 -15min内完成对DNA的特异切割。适用于质粒DNA、PCR产物以及基因组DNA的快速酶切。本公司生产的快速限制性内切酶在通用的10×SuperFast Buffer或10×SuperFast Color Buffer中均具有100%活性，方便在同一反应体系中同时进行多种酶切反应。此外，10×SuperFast Color Buffer内包含红色和黄色示踪染料，方便直接进行产物的凝胶电泳。10×SuperFast Color Buffer内的红色染料与2500bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与10bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。
【识别位点】
【产品组分】
【操作示例】
1. DNA快速酶切流程
a. 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：
注：本体系适用于经过纯化的PCR产物酶切。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10× SuperFast Buffer加入量可适当减少至2 μL。若下一步进行克隆等操作，酶切前需对PCR产物进行纯化。
b. 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴
c. 37℃温育15 min（质粒），或15~30 min（PCR产物），或30~60 min（基因组DNA），不建议长时间酶切；
d. 80℃温育20min即可使酶失活，停止反应（可选）；
e. 如果使用Color Buffer进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。
2. 双酶切或多酶切
a. 每种快速内切酶的用量为1μL，并根据需要适当扩大反应体系；
b. 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；
c. 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。
3. 适用于质粒的扩大反应体系
注：如果总反应体系大于20 μL，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
【甲基化修饰影响】
【质量控制】
1. 功能活性检测：
37℃下，在20μL通用反应体系中，1μL SuperFast NotI能够在15min内完全消化1μg p615 DNA。
2. 超长时间温育检测：
37℃下，在20μL通用反应体系中，将1μL SuperFast NotI与1μg p615 DNA共同温育3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。
3. 酶切 - 连接 - 再酶切检测：
最适反应温度下，使用10倍酶量的SuperFast NotI消化DNA底物，回收酶切产物，在22℃下使用适量Fast T4 DNA Ligase可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
4. 非特异性内切酶活性检测：
最适反应温度下，将1 μL NotI与1 μg超螺旋质粒DNA共同孵育4 h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒DNA仍然处于超螺旋状态。
5. 蓝白斑检测：
将含有单一lacZα基因的载体以1 μL NotI消化，重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞，涂布在含有对应抗生素、IPTG和X-gal的LB培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落，而连接错误（即DNA末端切口不完整）的产物将得到白色菌落。对于SuperFast系列限制酶而言，白色菌落比例应小于1%。
