
【储存条件】 常温运输,4 ℃保存,有效期12个月。
【产品简介】 zKirus为本公司研发的病毒规模化生产专用转染试剂,以特异的高纯度阳离子聚合物为主要配方,低毒,高效,可用于慢病毒、反转录病毒及各种血清型AAV病毒的转染,产生高滴度病毒。本包装zKirus体积为1.0 mL,正常可用于30-40个100 mm培养皿的病毒包装。
【适用范围】 1.病毒载体生产:本产品能够将带有编码病毒和目的基因的质粒转入工具细胞,进而生产带有目的基因的病毒载体。2.本产品具有优异的稳定性和效率,能够满足大规模病毒载体生产的需求。3.本产品适用于多种细胞类型的转染,包括贴壁细胞和悬浮细胞等。
【操作示例】
以100 mm培养皿为例,其他请按照培养面积等比例调整
1.包装细胞(一般为293T或其衍生细胞株)转染前30 min换含血清与双抗的完全培养基7.0 mL;
2.取25 µL zKirus与0.5 mL无血清培养基轻柔混匀;
3.取25-35 µg病毒载体/包装质粒与0.5 mL无血清培养基轻柔混匀;
4.将上述2中zKirus稀释液加入3中,轻柔吸打混匀;
5.室温静置5-10 min;
6.将1.0 mL转染混合液轻柔加入包装细胞中,轻柔混匀;
7.转染48-72 h收集细胞上清,用0.45 µm滤器过滤,得到病毒粗提液。
【注意事项】
1.转染前包装细胞系密度在85-95%为佳;
2.本转染试剂转染后,一般不用换液;若转染后细胞状态差,可在转染后5-6 h更换新鲜完全培养基;为增加出毒效率,质粒与zKirus比例可调整为1:1-2;
3.对易感染细胞,病毒粗提液可直接用于感染,对较难感染的细胞需要进行病毒浓缩或抗性/流式分选;
4.质粒建议用去内毒素试剂盒提取,浓度推荐1.0 µg/µL,且超螺旋比例高;
5.包装细胞状态直接影响转染及出毒效率,建议采用生长旺盛、传代次数少的包装细胞系;
6.本转染试剂也可用于其他细胞系的瞬时转染,可高效转染293T、293FT、293A、BHK-21、COS-7、CHO、HeLa、HepG2、MCF-7、NIH3T3、L929和4T1等细胞。质粒与zKirus的比例范围一般为1:1-3。由于本产品的低毒性,对难以转染细胞可将质粒与zKirus的比例调至1:3-5。