【储存条件】 干冰运输，-20 ℃保存。
【产品简介】
NanoCipher CRISPR Cas9基因编辑转染试剂盒，特别针对难转细胞系的基因编辑需求而设计。该试剂盒基于自组装蛋白纳米颗粒技术，打造了一种非病毒、非电转、非脂质体的新型转染试剂。通过NanoCipher CRISPR Cas9基因编辑转染试剂盒，基因编辑工具能够更高效、更安全地被递送到细胞内，从而实现精准且高效的基因编辑效果。
【产品组分】
【适用范围】 专攻经典难转细胞系（如Jurkat T、K562、THP-1）的CRISPR编辑。
【需自备试剂】
1.待转染细胞：转染前细胞必须处于良好的生长状态，活率>90%；
2.Opti-MEM培养基（提前预热或恢复至室温）、完全培养基、无菌EP管、所需转染的核酸样品。
【操作示例】
以96孔板体系为例
1.在40 µL Reagent A中加入0.25 µg Cas9 mRNA和0.25 µg sgRNA，充分混匀。（Reagent A使用前需颠倒混匀）
2.往上述混合物中加入1.4 μL Reagent B混匀。（此时可能出现一定的粘稠现象，属于正常情况）
3.转染前细胞处理
a. 悬浮细胞处理（去除FBS）： 将待转染细胞，300×g离心5min，收集细胞沉淀并去除上清液，加入Opti-MEM轻柔重悬细胞并进行洗涤，调至5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL备用。
b. 贴壁细胞处理（去除FBS）：转染前汇合率应保持在50%-80%；弃去培养基后，用Opti-MEM轻柔清洗细胞两次，并加入20 μL Opti-MEM备用。
4. 将步骤2配置好的转染体系与20 µL细胞悬液（可直接在离心管中孵育）或直接加入贴壁细胞，混合均匀。
5. 37℃培养箱孵育45-60min。
注意：孵育时间可根据不同细胞类型有所调整，建议孵育时间不超过2小时。
6. 对于悬浮细胞加入至少200 μL完全培养基，300×g离心5min，弃上清（为避免细胞损失，无需完全弃尽）；对于贴壁细胞，直接弃去混合液，补加培养基。
7. 加入适量完全培养基，进行细胞培养，后续可根据实验目的进行基因表达检测。
注意：阳性对照mRNA可在转染后5-48小时内观察到EGFP的表达；24小时流式检测阳性率。
附录一：转染不同细胞培养孔板规格的各组分使用含量（大体系转染推荐使用离心管孵育）
