【储存条件】 干冰运输，请按产品组分中所列存储条件妥善存放。
【产品简介】
NanoCipher plus CRISPR Cas9小鼠原代免疫细胞基因编辑转染试剂盒专为小鼠原代免疫细胞（如T细胞、NK细胞等）基因编辑设计的解决方案。该试剂基于自组装蛋白纳米颗粒技术，采用非病毒、非电转、非脂质体的创新递送方式，通过将Cas9 mRNA与sgRNA自组装成稳定的蛋白-核酸复合物，利用细胞的主动内吞机制实现高效递送。
【产品组分】
【适用范围】 适用于小鼠原代免疫细胞的基因编辑，能够实现基因的敲除。
【需自备试剂】
1.待转染细胞：小鼠原代免疫细胞应在一定条件下激活后进行转染，以确保最佳转染效率和细胞活力。
2.Opti-MEM培养基（提前预热或恢复至室温）、完全培养基、无菌EP管、所需转染的核酸样品。
【操作示例】
以96孔板体系为例
1.在40 µL Reagent A中加入0.25 µg Cas9 mRNA和0.25 µg sgRNA，充分混匀。（Reagent A使用前需颠倒混匀）
2.往上述混合物中加入0.7 μL Reagent B混匀。
3.往上述混合物中加入10 μL Reagent C混匀。（此时可能出现一定的粘稠现象，属于正常情况）
4.细胞处理：取待转染小鼠原代免疫细胞（尽量去除FBS,以免影响转染效果），300×g 离心5min，收集细胞沉淀，去上清，加入 Opti-MEM（提前预热或恢复至室温）重悬并洗涤，调至1×107 - 1.5×107 cells/mL 备用
5.将步骤3配置好的转染体系与20 µL细胞悬液（可直接在离心管中孵育）混合均匀。
6. 37℃培养箱孵育15-30min。
7. 加入至少200 μL完全培养基，300×g离心5min，弃上清（为避免细胞损失，无需完全弃尽)。
8. 加入适量完全培养基，进行细胞培养，72小时后可对靶点进行编辑效率分析。
【注意事项】
EGFP mRNA 阳性对照可用于转染效率检测，操作方法：上述操作示范中的步骤1替换为：在40 µL Reagent A (for Mouse Immunocytes)中加入0.5 µg EGFP mRNA充分混匀。后续的步骤与上表的操作示范一致。可在转染后5-48小时内观察到EGFP的表达，24小时流式检测阳性率。
附录一：转染不同细胞培养孔板规格的各组分使用含量（大体系转染推荐使用离心管孵育）
