RNA抽提有很多种方法，其中TRIzol法是最流行的。
TRIzol 法优点
1）快速
2）能抽提多种属总RNA
3）对少量的组织和细胞以及大量的组织和细胞都能有效分离
4）能抽提不同分子量大小的多种RNA
5）能够避免DNA和蛋白的污染
6）抽提出来的RNA适用于多种实验
welcome欢迎光临威尼斯生物zKrizol 总RNA提取试剂操作流程
1.样品预处理
（1）植物组织：取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将叶片剪碎后直接在zKrizol中研磨，研磨要迅速，建议不要超过60s。大约100 mg叶片使用1.0 mL zKrizol；
（2）动物组织：取新鲜或-70℃冻存组织，每30-50 mg组织加入1.0 mL zKrizol，匀浆仪匀浆。样品体积一般不要超过zKrizol体积的10%；
（3）各类贴壁细胞：每10cm2细胞面积加1.0 mL zKrizol裂解；
（4）各类悬浮细胞：离心沉淀细胞。加入zKrizol，用移液器吸打以裂解细胞。每5-10×106的动物、植物或酵母菌细胞或每1×107细菌加1.0 mL zKrizol裂解。
2.RNA提取
（1）将匀浆样品在15-30°C条件下孵育5 min。
可选步骤：4℃ 12000 rpm（约13400×g）离心10 min，取上清。注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应去除后取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。
（2）每1.0 mL zKrizol加入0.2 mL氯仿，充分颠倒混匀。4 ℃ 12000 rpm（约13400×g）离心15 min。离心后混合物分成三层：下层苯酚/氯仿层，中间层，上层无色的水样层，其中RNA存在于水样层中，水样层的体积大约为所加zKrizol体积的60%。
3.RNA沉淀
将适量水样层转移到新离心管中（若同时分离DNA和蛋白质，有机层和中间层请予以保留）。加入等体积异丙醇，充分混匀。若RNA产量少，可将混合的样品在-20℃孵育10-30 min（此步可低温过夜），4℃ 12000 rpm（约13400×g）离心15 min。RNA沉淀在离心前通常不可见，离心后沉淀附着于试管壁和管底。
4.RNA的漂洗
吸去上层悬液。每1.0 mL的zKrizol加入1.0 mL 75%乙醇（RNase-Free water配制），洗涤RNA沉淀1-2次，4℃ 12000 rpm（约13400×g）的离心力离心3-5 min。
5.RNA的溶解
室温干燥RNA沉淀，用一定剂量的RNase-Free water或0.5% SDS溶液（RNase-Free water配制）或100%甲酰胺（同位素标记时用甲酰胺溶解）溶解RNA。
附：六步法RNA提取简明流程：
1.预处理的样本中加1.0 mL zKrizol试剂，裂解样本；
2.每1.0 mL zKrizol加入0.2 mL氯仿或者0.1 mL Chloroformsafer氯仿替代物，振荡混匀，4℃或室温下，12000 rpm（约13400×g）离心15 min；
3.取上层400-500 μL至新样本管中，加等体积异丙醇，颠倒混匀，12000 rpm（约13400×g）离心10 min；
4.加1.0 mL 75%乙醇洗涤沉淀，12000 rpm（约13400×g）离心3-5 mim，弃上清；
5.重复第4步；
6.室温干燥3-5 min，加入适量（推荐30-100 μL）RNase-Free water，溶解沉淀。
